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ELISA競爭抑制法普遍存在的操作問題

兩對半使用elisa方法，其中HBSAg、HBsAb、HBeAg使用雙抗原/抗體夾心法檢測，而HBcAb、HBeAb使用競爭抑制法檢測。 而競爭抑制法的原理：酶標抗體與樣本抗體在同樣的體系中，與固相抗原競爭結(jié)合是等比關系。原論上講，應該先將樣本與酶標抗體先行混勻，然后加入反應也進行。但實際工作中并非如此，都是分開加入反應孔。這樣會造成先加入的先結(jié)合，與后加入者并不是公平的關系，因而也不符合等比原則。特別是在放置時間長，且溫度高的情況下，對結(jié)果有很大的影響。

第二軍醫(yī)大學長海醫(yī)院對此造成的影響進行了研究。將陰性標本94份并用生理鹽水進行1：30稀釋，在加入標本后按下表時間放置后再加入酶標抗體，然后檢測結(jié)果如下：
放置時間(min)陰性標本數(shù)臨界值-標本A450nm值假陽性率(%)

從上表可以看出，如果同時加入標本與酶標抗體，沒出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象。2分鐘后再加入酶標抗體，由于標本比酶標抗體先結(jié)合了兩分鐘，因此出現(xiàn)了7.4%的假陽性。30分鐘后再加，假陽性高達57.4%。因此建議競爭抑制法的項目，加十個樣本后立即加酶標抗體，這樣對檢測結(jié)果沒有影響。